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| 【圖】植物RNA提取 北京植物RNA提取 棉花RNA提取 |
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| 北京艾德萊生物有著植物RNA提取，北京植物RNA提取的研究院，例如棉花RNA提取、蘋果RNA提取等。
一般公司多糖多酚植物RNA提取試劑盒失敗原因和解決方案：很多植物RNA的樣品由于含有大量的多糖、多酚、代謝產(chǎn)物、色素等成分，造成RNA提取過程中氧化、褐化、降解、由于植物品種的多樣性造成情況更加復(fù)雜。手工的CTAB類的方法提取因?yàn)闀r(shí)間太長(zhǎng)，太繁瑣，手工方法不在討論之列。一直以來沒有一款好的試劑盒包括qiagen、promega等進(jìn)口試劑盒也無法滿足科研工作者對(duì)植物RNA提取的要求。
下面我們來分析一下植物RNA為什么不能提取成功的原因：市面上最常見的RNA提取試劑盒無非是兩種：第一種：TRIzol改良類方法（包括溶液型的和離心柱型的）、第二種：直接裂解過柱子的方法（離心柱）
第一種試劑盒失敗的原因1：RNA市面上面最流行的方法就是TRIzol，或者TRIzol改良，或者TRIzol加離心柱一類的改良方法。TRIzol也就是異硫氰酸胍/苯酚/氯仿原理一步法的方法最適合的對(duì)象是動(dòng)物源性的組織細(xì)胞，針對(duì)普通多糖多酚低的植物性的材料，TRIzol類原理產(chǎn)品也可以提取。但是多糖、多酚、次級(jí)代謝產(chǎn)物豐富的情況下，TRIzol類方法無法防止多糖多酚對(duì)于RNA/DNA分相的干擾，要么殘留大量DNA，要么殘留大量多糖、多酚或者次級(jí)代謝產(chǎn)物，氧化破壞RNA，或者殘留這些多糖多酚，色素代謝產(chǎn)物等抑制下游的反轉(zhuǎn)錄等反應(yīng)。限于技術(shù)水平的限制，市面上絕大多數(shù)的國(guó)產(chǎn)廠家是使用TRIzol的方法進(jìn)行改良，無論是不是加了離心柱。但是實(shí)踐證明，改良不能從根本上解決問題。判斷是否試劑盒使用這種改良的方法非常簡(jiǎn)單：是否裂解液含有苯酚的味道和使用氯仿，如果使用到了氯仿就是TRIzol方法的改良。
第二種試劑盒失敗的原因：直接裂解過柱子的方法是目前最先進(jìn)的方法，但是也是技術(shù)含量最高的方法。這個(gè)方法采用裂解液（不含苯酚，氯仿）直接裂解，RNA/DNA同時(shí)過柱子，然后在柱子上面直接分離RNA/DNA，所以，這種方法的優(yōu)點(diǎn)第一在于，避免了使用trizol在多糖多酚下不能成功分離RNA/DNA的弊端、第二在于，不使用有毒的苯酚氯仿。但是正是因?yàn)槠浼夹g(shù)先進(jìn)，所以難度很高，國(guó)內(nèi)廠家包括進(jìn)口公司有兩個(gè)技術(shù)難點(diǎn)一直沒有突破。第一，裂解液的成分必須針對(duì)去除多糖多酚進(jìn)行研發(fā)添加去多糖多酚，代謝產(chǎn)物成分。否則會(huì)同樣碰到多糖多酚干擾提取的問題。第二、和TRIzol原理不同，直接過柱法DNA/RNA同時(shí)加到吸附柱上去。如何去除DNA是第一個(gè)難點(diǎn)。否則會(huì)殘留大量DNA。 |
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